Роль кисспептинов в развитии ранней и поздней преэклампсии

Воднева Д.Н., Дубова Е.А., Павлов К.А., Шмаков Р.Г., Щеголев А.И.

ФГБУ Научный центр акушерства, гинекологии и перинатологии им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, Москва
Инвазия вневорсинчатого трофобласта в ткань матки является ключевым процессом успешного эмбриогенеза и плацентации. Важная роль в процессах плацентации отводится так называемым кисспептинам и их рецепторам.
Цель исследования. Изучить иммуногистохимические особенности экспрессии KISS и его рецептора GPR54 в терминальных ворсинах плаценты при преэклампсии.
Материал и методы. В исследование были включены 55 пациенток в возрасте от 18 до 41 года. Первую группу составили 15 беременных с ранней (до 34 недель беременности) преэклампсией. Вторую группу – 20 беременных в возрасте от 23 до 41 года с поздней (после 34 недель) преэклампсией. Все наблюдения каждой группы были разделены на подгруппы в зависимости от тяжести течения преэклампсии: умеренная и тяжелая. Контрольную группу составили 20 пациенток с физиологическим течением беременности и не имевших экстрагенитальной патологии.
Результаты. Ранняя преэклампсия достоверно отличалась от поздней тяжестью и лимитированием по времени пролонгирования беременности. В наблюдениях ранней тяжелой преэклампсии отмечались более высокие уровни экспрессии KISS-1 в синцитиотрофобласте и эндотелии капилляров терминальных ворсин по сравнению с контрольными показателями. Уровень экспрессии GPR54 в синцитиотрофобласте ворсин плаценты при поздней преэклампсии был ниже контрольных показателей.
Заключение. Выявленное повышение экспрессия KISS и его рецептора GPR54 в терминальных ворсинах плаценты при ранней преэклампсии отражает процессы ограничения инвазии трофобласта. Разнонаправленные изменения интенсивности реакции KISS и GPR54 в наблюдениях поздней преэклампсии свидетельствуют о различиях в морфо- и патогенезе ранней и тяжелой форм преэклампсии.

Ключевые слова

преэклампсия
кисспептины
инвазия трофобласта

Точные причины и механизмы развития преэклампсии до конца не ясны [1], однако в последнее время появились данные о разделении преэклампсии на раннюю (развившуюся до 34 недель беременности) и позднюю (развившуюся после 34 недель беременности) в зависимости от механизма ее развития [2]. Считается, что в патогенезе преэклампсии участвует ряд взаимосвязанных патологических процессов, в том числе нарушения инвазии трофобласта и формирования плацентарного дерева [3].

Инвазия вневорсинчатого трофобласта в ткань матки является ключевым процессом успешного эмбриогенеза и плацентации [4]. Деградация миоцитов вокруг спиральных артерий матки и замена эндотелиальных клеток эндоваскулярным трофобластом приводит в конечном итоге к своеобразному ремоделированию сосудов, обеспечивающему оптимальный маточно-плацентарный и межворсинчатый кровоток. Поверхностная инвазия трофобласта и неполное преобразование спиральных артерий лежат в основе развития преэклампсии [5]. При этом важная роль в процессах плацентации отводится так называемым кисспептинам и их рецепторам [6, 7].

Значительная роль в процессах успешного развития беременности и регуляции инвазии трофобласта в последнее время отводится KISS-1 гену и его рецептору GPR54, который был открыт в 1996 г. J.H. Lee с соавт. как ген супрессор метастазирования в клетках меланомы кожи [8]. Продуктом гена KISS-1 является метастин, который в свою очередь является лигандом для рецептора GPR54. Метастин и GPR54 экспрессируются в плаценте при нормальной беременности и участвуют в модуляции инвазии трофобласта путем ингибирования миграции клеток трофобласта [9].

Плацента является одним из наиболее богатых источников кисспептинов в человеческом организме. В плаценте KISS-1 выявлен в синцитиотрофобласте, а GPR-54 – в синцитиотрофобласте и также в ворсинчатом и вневорсинчатом трофобласте, предполагая возможную паракринную регуляцию [10]. В результате ряда исследований при применении иммуногистохимического анализа было установлено повышение экспрессии KISS-1 только в наблюдениях при раннем начале преэклампсии, а не при позднем ее дебюте. Вместе с тем уровень экспрессии GPR54 у пациенток с ранней (развившейся до 34 недель беременности) и поздней (развившейся после 34 недель беременности) преэклампсией и женщин с нормально протекавшей беременностью не имел достоверных отличий [2].

Цель исследования: изучить иммуногистохимические особенности экспрессии KISS и его рецептора GPR54 в терминальных ворсинах плаценты при преэклампсии.

Материал и методы исследования

В основу работы положен морфологический анализ 55 последов. Первую группу составили последы от 15 пациенток в возрасте от 21 до 38 лет, течение беременности у которых осложнилось развитием ранней (до 34 недель беременности) преэклампсии (табл. 1). Вторая группа – последы от 20 беременных в возрасте от 23 до 41 года с поздней (после 34 недель беременности) преэклампсией. Все наблюдения каждой группы были разделены на подгруппы в зависимости от тяжести течения преэклампсии: умеренная и тяжелая. Контрольную группу составили 20 пациенток (в возрасте от 18 до 40 лет) с физиологическим течением беременности и не имевшие экстрагенитальной патологии.

Критериями включения послужили: умеренная и тяжелая преэклампсия, соответствующая критериям МКБ-10, одноплодная беременность и согласие женщины на проведение исследования. Критериями исключения были: другие гипертензивные и метаболические осложнения беременности, генетические нарушения и пороки развития плода, инфекционная патология матери и/или плода, тяжелая соматическая патология матери и многоплодная беременность.

Макроскопическое изучение последов и взятие кусочков для гистологического исследования проводили в соответствии с рекомендациями [11]. Фрагменты ткани плаценты фиксировали в 10% нейтральном формалине. Гистологическое исследование проводили на парафиновых срезах, окрашенных гематоксилином и эозином.

Иммуногистохимическое исследование проводили на парафиновых срезах толщиной 3–4 мкм с использованием автоматизированной системы окрашивании «BenchMark-XT» (Ventana Medical Systems, Roshe), поликлональных кроличьих антител к KISS1 (разведение 1:500, Abbiotec), GPR54 (KISS-1R) (разведение 1:500, Abbiotec). В качестве фонового красителя использовали гематоксилин. Количественную оценку выраженности экспрессии изученных маркеров проводили в синцитиотрофобласте и эндотелиоцитах капилляров терминальных ворсин плаценты по уровню средней оптической плотности при помощи системы анализа изображения на базе микроскопа «Nicon Eclipse 80i» с использованием программы «Nis Elements 3.2». Статистическую оценку количественных данных проводили с использованием программного пакета «Statistica 8.0».

Результаты исследования

Всем пациенткам в обеих группах проводилась терапия преэклампсии согласно современным клиническим рекомендациям, включающая профилактику судорожной активности с использованием магния сульфата, профилактику респираторного дистресс-синдрома – при родоразрешении до 34 недель беременности, 2–3-компонентную гипотензивную терапию, с использованием α2-адреномиметиков (метилдопа), блокаторов кальциевых каналов (нифедипин), α-адреноблокаторов (метопролол).

Во всех наблюдениях ранней преэклампсии родоразрешение осуществлялось путем операции кесарева сечения, что было обусловлено необходимостью досрочного родоразрешения в связи с тяжестью преэклампсии и неготовностью родовых путей, во II группе кесарево сечение было проведено в 14 (70 %) наблюдениях (р<0,05).

На гистологических препаратах плаценты контрольной группы, окрашенных гематоксилином и эозином, ворсинчатое дерево в основном было представлено терминальными ворсинами, порядка 20–30% его площади составляли зрелые промежуточные ворсины. В целом строение ворсинчатого дерева соответствовало сроку беременности. Имелось небольшое количество синцитиальных узелков, отражающих компенсаторно-приспособительные процессы, а также отмечались умеренные отложения фибриноида, преимущественно вокруг стволовых ворсин, и мелкие фокусы кальциноза в области базальной пластинки.

При анализе наблюдений преэклампсии нами было установлено преобладание процессов разветвленного ангиогенеза в структуре ворсин: множество мелких терминальных ворсин с многочисленными синцитио-капиллярными мембранами и большим количеством синцитиальных почек. Более выраженные изменения отмечались при тяжелых формах преэклампсии. Кроме того, в большинстве изученных нами наблюдений установлены нарушения плацентарного кровообращения в виде мелких тромбов в сосудах хориальной пластинки и стволовых ворсин, а также многочисленных мелких инфарктов ворсинчатого дерева. Несколько чаще инфаркты в области плацентарных септ отмечались в наблюдениях ранней преэклампсии и при умеренной степени тяжести. В то же время периворсинчатые отложения фибриноида чаще наблюдались у беременных с тяжелыми формами преэклампсии.

При иммуногистохимическом изучении терминальных ворсин на препаратах плаценты контрольной группы нами установлена более выраженная экспрессия KISS по сравнению с его рецептором GPR54. При этом интенсивность реакции KISS и GPR54 в синцитиотрофобласте выше, чем в эндотелиоцитах капилляров этих ворсин.

В наблюдениях ранней тяжелой преэклампсии отмечается более высокий уровень экспрессии изученных маркеров в синцитиотрофобласте в эндотелии капилляров по сравнению с контрольными показателями: KISS – на 21,4 и 13,2% (p<0,05) (рис. а), а GPR54 – на 33,3 и 32,9% соответственно (p<0,05) (рис. б). В результате таких изменений наблюдается повышение на 7,3% по сравнению с контролем синцитио-эндотелиального градиента экспрессии KISS в терминальных ворсинах. Градиент же экспрессии GPR54 практически остался без изменений.

На препаратах ранней преэклампсии умеренной тяжести экспрессия KISS в синцитиотрофобласте терминальных ворсин на 3,6% ниже контрольного уровня, а в эндотелиальных клетках капилляров, наоборот, выше на 7,4%. При этом уровень экспрессии GPR54 в синцитиотрофобласте превышает на 11,1% контрольные показатели (p<0,05), в эндотелии не отличаются от них.

У беременных, страдающих поздней преэклампсией, экспрессия KISS выше контрольного уровня. При тяжелой форме на 17,9 и 10,3% в синцитиотрофобласте и эндотелиоцитах капилляров соответственно (p<0,05), в наблюдениях умеренной преэклампсии – на 5,7% (p>0,05) и 23,5% (p<0,05) соответственно. Вследствие подобных изменений синцитио-эндотелиальный градиент экспрессии KISS в терминальных ворсинах превышает на 6,8% (p>0,05) значения контрольной группы при тяжелой форме и меньше их на 14,6% (p<0,05) при умеренной преэклампсии.

Уровень экспрессии GPR54 в синцитиотрофобласте ворсин плаценты при поздней преэклампсии ниже контрольных показателей на 9,1% при тяжелой форме и 8,1% при умеренной тяжести (p<0,05). В эндотелиоцитах капилляров интенсивность реакции GPR54 меньше контрольного уровня в наблюдениях умеренной преэклампсии и не отличается от него при тяжелой форме. При этом синцитио-эндотелиальный градиент экспрессии GPR54 меньше (на 8,5%) контрольных значений при тяжелой преэклампсии и практически не отличается от них в наблюдениях умеренной степени тяжести.

При иммуногистохимическом изучении терминальных ворсин на препаратах плаценты контрольной группы нами установлена более выраженная экспрессия KISS по сравнению с его рецептором GPR54. При этом интенсивность реакции KISS и GPR54 в синцитиотрофобласте выше, чем в эндотелиоцитах капилляров этих ворсин (рисунок).

Таким образом, при иммуногистохимическом изучении препаратов плаценты выявлено повышение уровня экспрессии KISS при всех формах преэклампсии. В то же время интенсивность реакции GPR54 была повышена в наблюдениях ранней преэклампсии и снижена при поздней форме.

Полученные нами результаты согласуются с данными литературы о более высоком содержании мРНК KISS-1 в образцах плаценты беременных с преэклампсией по сравнению с контрольной (нормальной) группой [12]. Однако J.E. Cartwright и P.J. Williams [13] приводят данные о снижении иммуногистохимического уровня экспрессии KISS1 в структурах плаценты при преэклампсии. Возможной причиной подобных расхождений является недоучет данных о виде преэклампсии. Действительно, нами установлено, что уровень экспрессии KISS отличается в наблюдениях ранней и поздней преэклампсии и зависит от тяжести ее течения.

При микроскопическом изучении ткани плацент контрольной группы отмечено соответствие степени созревания ворсинчатого дерева сроку гестации и признаки баланса между процессами разветвленного и неразветвленного ангиогенеза.

Несмотря на увеличивающееся количество теорий патогенеза преэклампсии, большинство исследователей в последнее время поддерживают концепцию о нарушениях цитотрофобластической инвазии. Так, необходимым условием нормального развития и функционирования плаценты является врастание цитотрофобластов в материнские спиральные артерии и замещение им эндотелия и мышечной оболочки. Такое ремоделирование начинается на 18–20 неделях беременности и характеризуется преобразованием спиральных артерий в широкие кровеносные сосуды с низким сопротивлением кровотоку [14].

Недостаточная степень инвазии трофобласта может привести либо к элиминации эмбриона уже в первые недели беременности, либо, в случае прогрессирования беременности, к ограничению ростовых и функциональных возможностей плаценты с последующим развитием различных акушерских осложнений. Недостаточность второй волны цитотрофобластической инвазии, направленной на ремоделирование материнских артерий для поступления достаточного притока крови к плоду, считается основным фактором патогенеза преэклампсии [4].

Следует отметить, что между процессами инвазии трофобласта при беременности и опухолевой прогрессией существует много общего. При этом отличительной особенностью трофобластической инвазии от опухолевой является ее четкая регуляция во времени и пространстве (до 1/3 миометрия). Решающее значение в процессах регуляции инвазии трофобласта и соответственно успешного развития беременности принадлежит балансу между генами, способствующими инвазии и генами-супрессорами [15]. Особая роль в регулировании инвазии трофобласта принадлежит системе кисспептинов, включающей, в частности, KISS-1 ген и его рецептор GPR54. Наиболее высокие уровни мРНК и белка KISS-1 в плаценте отмечаются в первом триместре беременности [16], что и определяет их роль в процессах имплантации и плацентации. По мнению D.-W. Park с соавт. [9], именно кисспептинам и GPR54 принадлежит основная роль в модуляции инвазии трофобласта, которая осуществляется путем ингибирования его миграции.

Следует также добавить, что в результате применения количественных методов полимеразной цепной реакции, Вестерн-блоттинга и иммуногистохимического анализа повышение экспрессии KISS-1 было зарегистрировано только у беременных при раннем начале преэклампсии, а не при позднем ее дебюте. Согласно полученным нами данным у беременных с ранней преэклампсией отмечается более выраженная интенсивность реакции KISS и его рецептора GPR54 в изученных структурах терминальных ворсин и базальной пластинки. При этом более высокие уровни зарегистрированы нами при тяжелой форме, что согласуется с данными [14] о том, что повышение уровней мРНК и белка KISS-1 в плаценте коррелирует с тяжестью преэклампсии.

При анализе иммуногистохимических препаратов плаценты при поздней преэклампсии нами выявлено повышение уровня экспрессии KISS-1 в терминальных ворсинах и снижение интенсивности реакции GPR54 в синцитиотрофобласте ворсин по отношению к значениям контрольной группы, что подтверждает данные литературы о различиях в патогенезе ранней и поздней преэклампсии [17–19].

Следует также добавить, что более высокий уровень экспрессии KISS-1 описан в структурах плаценты при преждевременных родах [17], однако рождение детей с низкой массой тела коррелирует с более низким уровнем кисспептинов в трофобласте [20].

Представляет интерес и тот факт, что уровень циркулирующих кисспептинов у пациенток с ожирением, а также с инсулинорезистентностью, значительно ниже по сравнению с женщинами, имеющими нормальный индекс массы тела. Подобные данные о положительной корреляции между мРНК KISS-1 и индексом массы тела [21] отражают, видимо, недостаточную функцию плаценты у женщин, страдающих ожирением. Считается, что ожирение, а также инсулинорезистентность являются факторами, способствующими развитию преэклампсии [22].

Таким образом, иммуногистохимическими методами установлено повышение экспрессия KISS и его рецептора GPR54 в терминальных ворсинах плаценты при ранней преэклампсии, что, видимо, отражает процессы ограничения инвазии трофобласта и последующей недостаточности спиральных артерий. В наблюдениях поздней преэклампсии выявлено повышение уровня экспрессии KISS и снижение интенсивности реакции GPR54, свидетельствующее о различиях в морфо- и патогенезе ранней и тяжелой форм преэклампсии.

Список литературы

  1. Von Dadelszen P., Magee L.A. preeclampsia: an update. Curr. Hypertens. Rep. 2014; 16(8) : 454.
  2. Qiao C., Wang C., Zhao J., Liu C., Shang T. Elevated expression of KiSS-1 in placenta of Chinese women with early-onset preeclampsia. PLoS One. 2013; 7(11): e48937.
  3. Oudejans C.B., van Dijk M., Oosterkamp M., Lachmeijer A., Blankenstein M.A. Genetics of preeclampsia: paradigm shifts. Hum. Genet. 2007; 120: 607-12.
  4. Милованов А.П., Кириченко А.К. Цитотрофобластическая инвазия – ключевой механизм развития нормальной и осложненной беременности. Красноярск; 2009. 211 с.
  5. Brosens J.J., Pijnenborg R., Brosens I.A. The myometrial junctional zone spiral arteries in normal and abnormal pregnancies: a review of the literature. Am. J. Obstet. Gynecol. 2002; 187: 1416-23.
  6. Hiden U., Bilban M., Knöfler M., Desoye G. Kisspeptins and the placenta: regulation of trophoblast invasion. Rev. Endocr. Metab. Disord. 2007; 8: 31-9.
  7. Armstrong R.A., Reynolds R.M., Leask R., Shearing C.H., Calder A.A., Riley S.C. Decreased serum levels of kisspeptin in early pregnancy are associated with intra-uterine growth restriction and pre-eclampsia. Prenat. Diagn. 2009; 29(10): 982-5.
  8. Lee J.H., Miele M.E., Hicks D.J., Phillips K.K., Trent J.M., Weissman B.E., Welch D.R. KiSS-1, a novel human malignant melanoma metastasis-suppressor gene. J. Natl. Cancer Inst. 1996; 88(23) : 1731-7.
  9. Park D.W., Lee S.K., Hong S.R., Han A.R., Kwa-Kim J., Yang K.M. Expression of Kisspeptin and its receptor GPR54 in the first trimester trophoblast of women with recurrent pregnancy loss. Am. J. Reprod. Immunol. 2012; 67(2): 132-9.
  10. Horikoshi Y., Matsumoto H., Takatsu Y., Ohtaki T., Kitada C., Usuki S., Fujino M. Dramatic elevation of plasma metastin concentrations in human pregnancy: metastin as a novel placenta-derived hormone in humans. J. Clin. Endocrinol. Metab. 2003; 88: 914-9.
  11. Щеголев А.И., Павлов К.А., Дубова Е.А. Морфология плаценты. М.; 2010. 46 с.
  12. Vazquez-Alaniz F., Galaviz-Hernandez C., Marchat L.A., Salas-Pacheco J.M., Chairez-Hernandez I., Guijarro-Bustillos J.J., Mireles-Ordaz A. Comparative expression profiles for KiSS-1 and REN genes in preeclamptic and healthy placental tissues. Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 2011; 159(1) : 67-71.
  13. Cartwright J.E., Williams P.J. Altered placental expression of kisspeptin and its receptor in preeclampsia. J. Endocrinol. 2012; 214(1): 79-85.
  14. Gerretsen G., Huisjes H.J., Elema J.D. Morphological changes of the spiral arteries in the placental bed in relation to pre-eclampsia and fetal growth retardation. Br. J. Obstet. Gynaecol. 1981; 88(9): 876-81.
  15. Novakovic B., Rakyan V., Ng H.K., Manuelpillai U., Dewi C., Wong N.C. et al. Specific tumour-associated methylation in normal human term placenta and first-trimester cytotrophoblasts. Mol. Hum. Reprod. 2008; 14: 547-54.
  16. Bilban M., Ghaffari-Tabrizi N., Hintermann E., Bauer S., Molzer S., Zoratti C. et al. Kisspeptin-10, a KiSS-1/metastin-derived decapeptide, is a physiological invasion inhibitor of primary human trophoblasts. J. Cell Sci. 2004; 117(8): 1319-28.
  17. Raymond D., Peterson E. A critical review of early-onset and late-onset preeclampsia. J. Obstet. Gynecol. Surv. 2011; 66: 497-506.
  18. Ходжаева З.С., Холин А.М., Вихляева Е.М. Ранняя и поздняя преэклампсия: парадигмы патобиологии и клиническая практика. Акушерство и гинекология. 2013; 10: 4-11.
  19. Воднева Д.Н., Романова В.В., Дубова Е.А., Павлов К.А., Шмаков Р.Г., Щеголев А.И. Клинико-морфологические особенности ранней и поздней преэклампсии. Акушерство и гинекология. 2014; 2: 35-40.
  20. Smets E.M., Deurloo K.L., Go A.T., van Vugt J.M., Blankenstein M.A., Oudejans C.B. Decreased plasma levels of metastin in early pregnancy are associated with small for gestational age neonates. Prenat. Diagn. 2008; 28(4): 299-303.
  21. Cockwell H., Wilkinson D.A., Bouzayen R., Imran S.A., Brown R., Wilkinson M. KISS1 expression in human female adipose tissue. Arch. Gynecol. Obstet. 2013; 287(1): 143-7.
  22. Catalano P.M. Obesity, insulin resistance, and pregnancy outcome. Reproduction. 2010; 140(3): 365-71.

Об авторах / Для корреспонденции

Воднева Дарья Николаевна, аспирант 3-го года обучения, ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-70-43. E-mail: d_selivanova@oparina4.ru
Дубова Елена Алексеевна, д.м.н., с.н.с. 2-го патологоанатомического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-28-92. E-mail: dubovaea@gmail.com
Павлов Константин Анатольевич, к.м.н., научный сотрудник 2-го патологоанатомического отделения ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-28-92. E-mail: pavlovkos@gmail.com
Шмаков Роман Георгиевич, д.м.н., зав. акушерским физиологическим отделением ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-73-00. E-mail: mdshmakov@mail.ru
Щеголев Александр Иванович, д.м.н., зав. 2-м патологоанатомическим отделением ФГБУ НЦАГиП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России. Адрес: 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4. Телефон: 8 (495) 438-28-92. E-mail: ashegolev@oparina4.ru

Также по теме

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.