Бактериальный вагиноз (БВ) встречается у 10–30% беременных женщин и может приводить к осложнениям гестации и послеродового периода [1–3]. Поддержание нормоценоза влагалища является важной составляющей противоинфекционного барьера на пути проникновения бактерий к плоду [1, 4]. После первичного эпизода БВ при наличии предрасполагающих факторов может происходить недостаточное восстановление биоценоза влагалища, что впоследствии ведет к рецидивирующему течению заболевания [5]. В развитии рецидивов БВ важную роль, возможно, играет состояние неспецифического иммунитета влагалища, неполноценность которого может проявляться снижением эффективности антимикробной защиты. Одной из составных частей неспецифического иммунитета влагалища является система антимикробных пептидов, которая одной из первых реагирует на качественные и количественные изменения микрофлоры [2, 6, 7]. В указанной системе значительная роль принадлежит дефензинам, которые, помимо основного микробицидного действия, обладают также противогрибковой, противовирусной, иммуномодулирующей, репаративной, хемотаксической и цитотоксической активностью [8]. Возможно, что особенности функции дефензинов у беременных женщин имеют значение в рецидивировании БВ у беременных женщин. Изучение системы дефензинов и других антимикробных пептидов у беременных женщин с повторяющимися эпизодами БВ, возможно, позволит понять механизмы нарушений и способствовать разработке методов терапии и профилактики.
Цель настоящего исследования состояла в оценке уровня β-дефензина-2 и состава влагалищной микрофлоры у беременных женщин с рецидивирующим БВ.
Материал и методы исследования
В исследование вошли 40 беременных женщин с рецидивирующим БВ, которые составили основную группу наблюдения, и 40 здоровых беременных пациенток, из которых была сформирована группа контроля. Диагноз рецидивирующего БВ устанавливали при наличии не менее двух подтвержденных эпизодов заболевания за истекший период беременности.
В исследование не включались беременные женщины с наличием инфекционно-воспалительных заболеваний нижнего отдела репродуктивного тракта другой этиологии, в числе которых заболевания передающиеся половым путем, кандидоз, аэробные вагиниты.
В процессе исследования изучали клинические и лабораторные характеристики дисбиоза, содержание β-дефензина-2 в смывах из влагалища, качественный и количественный состав влагалищной флоры.
Лабораторные исследования проводились в период ремиссии заболевания, спустя не менее 14 дней после окончания лечения последнего эпизода БВ. Состояние ремиссии устанавливали на основе отсутствия жалоб и достаточного числа лабораторных критериев БВ по Амселю. Забор материала для бактериологического исследования осуществлялся по стандартной методике при помощи уретрального зонда. Материал для определения концентрации антимикробных пептидов получали путем введения в задний свод влагалища 5 мл физиологического раствора, с последующей аспирацией и замораживанием содержимого.
Для оценки влагалищной флоры определяли общую бактериальную массу (ОБМ), содержание лактобактерий и анаэробов с использованием полимеразной цепной реакции. Количество микроорганизмов выражали в виде десятичного логарифма абсолютного количества ДНК. Для выявления дисбиоза и доли каждого микроорганизма в ОБМ проводился анализ относительного количества отдельных микроорганизмов, которое вычисляли как логарифм отношения определяемого микроорганизма к величине ОБМ. Состояние нормоценоза определялось содержанием лактобактерий. При этом логарифм содержания лактобактерий в значениях от 0 до -0,1 расценивали как состояние нормоценоза. Величины от -0,1 до -0,7 соответствовали состоянию умеренного дисбиоза, показатели менее -0,8 характеризовали состояние выраженного дисбиоза. Содержание анаэробов в значениях менее -2 расценивалось как доля этих бактерий в ОБМ менее 1%. Величины от -2 до -1, от -1 до -0,4, и от -0,4 и выше указывало на долю анаэробов в ОБМ 1–10%, 10–40% и более 40% соответственно.
Определение уровней β-дефензина-2 проводили немедленно после размораживания образцов с помощью иммуноферментного анализа наборами ELISA (БиоХимМак) по рекомендуемой производителями методике.
Статистическую обработку данных осуществляли с помощью программы Statistica 8.0. Для сравнения исследуемых групп по количественным переменным применяли непараметрический критерий Манна–Уитни, по качественным переменным группы сопоставляли с использованием критерия χ2 Пирсона. Различия считали статистически значимыми при p<0,05.
Результаты исследования
Возраст беременных женщин колебался от 20 до 37 лет, составляя в среднем 26±4 года. Обследование всех пациенток было выполнено в первой половине беременности, в сроке гестации от 12 до 19 нед (15±2 нед). Пациентки основной и контрольной групп были сопоставимы по возрастным характеристикам, сроку гестации и паритету.
На момент обследования пациентки основной группы находились в состоянии ремиссии и не предъявляли активных жалоб на выделения из половых путей и другие проявления дисбиоза. В то же время, при лабораторном исследовании у 35 (87,5%) беременных женщин данной группы отмечалось присутствие одного или двух критериев БВ (табл. 1).
Наиболее часто в основной группе встречалось увеличение pH влагалища, более чем в половине случаев (52,5%) имело место сочетание двух критериев дисбиоза. В группе контроля наблюдались только единичные случаи изолированного повышения pH, наличия ключевых клеток и положительной реакции на летучие амины. Таким образом, несмотря на ремиссию, у пациенток с рецидивирующим БВ сохранялись отклонения во влагалищном биоценозе, возможно, указывающие, на потенциальный риск повторного возникновения заболевания.
Для объяснения возможных причин указанных отклонений у пациенток исследуемых групп была выполнена оценка качественного и количественного состава бактериальной флоры влагалища. В результате проведенного анализа выявлено снижение ОБМ у беременных пациенток с рецидивирующим БВ в сравнении со здоровыми беременными женщинами. При этом уменьшение ОБМ сопровождалось сокращением числа лактобактерий, количество которых было статистически значимо меньше в основной группе женщин. Относительное содержание лактобацилл во влагалище у 80% женщин с рецидивирующим БВ соответствовало дисбиозу средней степени (табл. 2).
Анализ качественного и количественного состава анаэробной флоры влагалища выявил различия в числе отдельных бактериальных видов в исследуемых группах беременных женщин. У пациенток с рецидивирующим БВ наблюдалось увеличение доли бактерий видов Megasphaera, Veilonella, Dialister, Sneathia, Leptotrihia, Fusobacterium, содержание которых в ОБМ достигало 10–40% (табл. 3).
Полученные результаты позволяют заключить, что у пациенток с рецидивирующим БВ в период ремиссии, на фоне снижения ОБМ и числа лактобактерий, повышено содержание отдельных видов анаэробов, что, возможно, определяет персистирование дисбиоза влагалища и потенциальный риск рецидивирования заболевания.
В дальнейшем было выполнено определение уровня β-дефензина-2 во влагалище у беременных женщин исследуемых групп. У пациенток основной группы данный антимикробный пептид присутствовал у 23 (57,5%) женщин, тогда как в контрольной группе β-дефензин-2 обнаруживали статистически значимо чаще (у 32 из 40 женщин; 80%; p=0,030). При этом медиана концентраций β-дефензин-2 была выше у здоровых беременных женщин (1410 пг/мл; 25% – 75% 312 – 1710), в сравнении с пациентками, страдающими рецидивирующим БВ (442 пг/мл; 25% – 75% 0 – 758; p<0,001). Анализ зависимостей между содержанием во влагалище β-дефензина-2 и концентрацией анаэробных бактерий выявил статистически значимую отрицательную корреляцию. Низкие концентрации антимикробного пептида во влагалище ассоциировались с повышенным количеством бактерий видов Megasphaera, Veilonella, Dialister (-0,64, р<0,001).
Заключение
Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что у беременных женщин с рецидивирующим БВ в период ремиссии, несмотря на отсутствие жалоб, сохраняется потенциальный риск для обострения заболевания, что демонстрируется снижением концентрации лактобактерий, ростом количества отдельных видов анаэробных микроорганизмов и развитием умеренного дисбиоза. Данные процессы, возможно, связаны с особенностями функционирования системы антимикробных пептидов, что проявляется недостаточной продукцией дефензинов. Причины указанных нарушений требуют дальнейшего изучения.
