Полноэкзомное секвенирование супружеских пар с бесплодием неясного генеза (пилотное исследование)

Киракосян Е.В., Померанцева Е.А., Павлович С.В.

1) ФГАОУ ВО «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации (Сеченовский Университет), Москва, Россия; 2) ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр акушерства, гинекологии и перинатологии имени академика В.И. Кулакова» Министерства здравоохранения Российской Федерации, Москва, Россия
Цель: Провести пилотное исследование – полноэкзомное секвенирование супружеских пар с бесплодием неясного генеза.
Материалы и методы: Проведено полноэкзомное секвенирование ДНК из образцов периферической крови, полученных от 6 супружеских пар (женщин и мужчин), целенаправленно отобранных из группы бесплодия неясного генеза на основании клинико-анамнестических данных, лабораторных, инструментальных показателей, результатов использования методов вспомогательной репродукции. Оценка клинической значимости (патогенности) выявленных вариантов проводилась на основе рекомендаций Американского колледжа медицинской генетики и геномики (American College of Medical Genetics and Genomics, ACMG) и рекомендаций Российского общества медицинских генетиков по интерпретации данных, полученных методами высокопроизводительного секвенирования.
Результаты: По результатам полноэкзомного секвенирования у 6 исследованных супружеских пар с бесплодием неясного генеза не было обнаружено патогенных и вероятно патогенных вариантов, имеющих отношение к фенотипу пациентов, а также случайных (вторичных) находок (согласно списку генов ACMG).
Заключение: При полноэкзомном секвенировании наиболее типичных пациентов с бесплодием неясного генеза не было обнаружено известных вариантов, с которыми может быть связано бесплодие.

Ключевые слова

бесплодие неясного генеза
необъяснимое бесплодие
идиопатическое бесплодие
ооцитарный фактор
арест раннего эмбриогенеза
экстракорпоральное оплодотворение
ЭКО
вспомогательные репродуктивные технологии
ВРТ
генетические варианты
полноэкзомное секвенирование

Наиболее наглядной клинической моделью нарушений репродуктивной системы является бесплодие неясного генеза (БНГ), при котором репродуктивная система анатомически и функционально полноценна, однако беременность не наступает [1–3].

По данным литературы, проводимые в мире исследования, посвященные изучению БНГ, немногочисленны и обладают невысоким уровнем доказательности. Международным консенсусом были определены 10 приоритетных направлений будущих исследований в отношении бесплодия, в их числе – БНГ [4].

Ранее мы получили данные о том, что при БНГ в программах экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) количество зрелых ооцитов достаточное, частота оплодотворения нормальная, однако частота бластуляции низкая, в основном за счет остановок развития эмбрионов до 3-х суток культивирования, что является признаком нарушения раннего эмбриогенеза и, следовательно, показанием для использования ЭКО с целью достижения беременности [5].

Спектр исследований репродуктивной системы человека расширяется и в настоящее время включает высокотехнологичные методы, направленные на получение генетической, эпигенетической и другой информации при различных нарушениях репродуктивной системы [6].

Полноэкзомное секвенирование – один из методов высокопроизводительного секвенирования (next generation sequencing, NGS), с помощью которого одномоментно расшифровывается структура экзонов – последовательностей ДНК, кодирующих белки человека [7].

При проведении полноэкзомного секвенирования могут быть выявлены варианты известных генов, а также обнаруживаться новые генетические особенности и закономерности, возможно, связанные с исследуемым заболеванием. Также полноэкзомное секвенирование может служить исследовательским инструментом поиска при отсутствии гипотезы, то есть предварительного представления о том, какие гены, сигнальные каскады или метаболические пути изменены в организме пациента, как при БНГ. В этом случае в исследование включаются не семейные, а спорадические случаи заболевания с похожей клинической картиной [8, 9].

Проведение полноэкзомного секвенирования у супружеских пар с БНГ позволит проверить наличие вариантов, роль которых обсуждается в научных исследованиях и обнаружить новые особенности и закономерности в генотипе у пациентов с БНГ [10]. Так, низкое качество ооцитов при бесплодии может быть обусловлено вариантами генов PATL2, TUBB8, WEE2 и PAD16: изменение экспрессии генов [OMIM gene ID: 614661, OMIM phenotype: OOMD4 (oocyte maturation defect, нарушение созревания ооцитов), OMIM phenotype ID: 617743, наследование: аутосомно-рецессивное] PATL2 [15q21.1] и [OMIM gene ID: 616768.0001, OMIM phenotype: OOMD2, OMIM phenotype ID: 616780, наследование: аутосомно-доминантное] TUBB8 [10p15.3] приводит к нарушению созревания ооцитов в MII; [OMIM gene ID: 614084.0001-614084.0003, OMIM phenotype: OOMD5, OMIM phenotype ID: 617996, наследование: аутосомно-рецессивное] WEE2 [7q34] – снижению способности ооцитов к полноценному оплодотворению и формированию эмбрионов; [OMIM gene ID: 610363.0001-610363.0005, OMIM phenotype: PREMBL2 (preimplantation embryonic lethality, преимплантационная гибель эмбрионов), OMIM phenotype ID: 617234, наследование: аутосомно-рецессивное] PAD16 [1p36.13] – остановке развития эмбрионов на ранних стадиях. С дефектами созревания ооцитов и преимплантационной эмбриональной летальностью также могут быть связаны гены ZP1, ZP3, ZP2, TLE6 [11, 12].

При проведении полноэкзомного секвенирования помимо основной информации в качестве случайных находок могут обнаруживаться другие значимые с медицинской точки зрения варианты, в связи с чем возникает этический вопрос о необходимости и объеме предоставляемой пациенту информации. Специалистами Американского колледжа медицинской генетики и геномики (American College of Medical Genetics and Genomics, ACMG) опубликован список генов, об обнаружении вариантов которых рекомендуется сообщать пациентам с целью ранней диагностики заболевания, однако единого решения этической проблемы полноэкзомного секвенирования в настоящее время не разработано [13, 14].

Сегодня назначение генетических исследований пациентам с БНГ не регламентировано клиническими рекомендациями и проводится эмпирически при незакономерно малом количестве зрелых ооцитов, низкой частоте оплодотворения, остановке развития эмбрионов на ранних стадиях в программах ЭКО.

Цель исследования: провести полноэкзомное секвенирование супружеских пар с БНГ.

Материалы и методы

БНГ диагностируется у пар, стандартное обследование которых не приводит к установлению причины бесплодия: менструальный цикл регулярный, овуляторный, маточные трубы проходимы, эндометрий без патологических изменений, показатели спермы в норме, при проведении лапароскопии и гистероскопии патология не обнаруживается.

В отделении клинической генетики Института репродуктивной генетики ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (далее – Центр) было проведено пилотное исследование – полноэкзомное секвенирование ДНК из образцов периферической крови, полученных от 6 супружеских пар (женщин и мужчин), целенаправленно и методично отобранных из проспективной группы исследования пациентов с БНГ (n=45) для того, чтобы исключить предполагаемые генетические причины бесплодия у супружеских пар с БНГ [3].

Отбор пациентов для полноэкзомного секвенирования проводился согласно критериям:

  • диагноз бесплодия установлен до 35 лет;
  • длительность бесплодия 5 лет и более;
  • неотягощенный соматический и гинекологический анамнез;
  • нормальный уровень гормонов в крови;
  • нормозооспермия у партнера;
  • нормальный женский – (46ХХ) и мужской – (46ХY) кариотипы;
  • отсутствие признаков патологии при ультразвуковом исследовании органов и систем;
  • безуспешные попытки внутриматочной инсеминации;
  • наличие 3 и более безуспешных попыток ЭКО с регистрацией нарушения развития эмбрионов или отсутствием эмбрионов.

Оценка клинической значимости (патогенности) выявленных вариантов проводилась на основе рекомендаций ACMG и рекомендаций Российского общества медицинских генетиков по интерпретации данных, полученных методами высокопроизводительного секвенирования [15, 16].

У включенных в исследование 6 супружеских пар с БНГ проводился забор 25 мл периферической крови из локтевой вены. Все пациенты подписали информированное добровольное согласие об участии в исследовании. Секвенирование ДНК пациентов проводилось на платформе NovaSeq 6000 (WES, секвенирование полного экзома). Для обогащения целевыми фрагментами использовался набор для обогащения Illumina TruSeq Exome.

Обработка данных секвенирования проводилась с использованием алгоритма, включающего выравнивание прочтений на референсную последовательность генома hg38, коллинг и фильтрацию вариантов по качеству. Для всех вариантов, прошедших фильтрацию по качеству, проводилась аннотация с использованием Ensembl Variant Effect Predictor (VEP) с применением ряда алгоритмов предсказания значимости вариантов (SIFT, PolyPhen-2, SpliceAI) [17].

Для оценки популяционных частот выявленных вариантов использовалась база данных Genome Aggregation Database (gnomAD) [18]. Для оценки клинической релевантности выявленных вариантов использовались базы данных OMIM, ClinVar, LOVD, RUSeq и другие специализированные базы данных [19–23].

Рассматривались варианты, с которыми могло быть связано бесплодие в паре, и случайные находки, согласно списку генов для сообщения вторичных находок ACMG, за исключением не описанных вариантов в гене TTN, приводящих к потере функции белка [13, 14, 24].

Следует отметить, что значимость обнаруженных вариантов может меняться с течением времени при накоплении научных и клинических данных.

Ограничения: метод не позволяет выявлять инсерции и делеции длиной более 10 пар нуклеотидов, варианты в интронных областях (за исключением канонических сайтов сплайсинга), вариации длины повторов (в том числе экспансии триплетов). Метод не предназначен для определения цис- или транс-положения пар гетерозиготных вариантов, а также для оценки уровня метилирования, выявления хромосомных перестроек, полиплоидии, вариантов в состоянии мозаицизма [15].

Результаты

По результатам полноэкзомного секвенирования у исследованных супружеских пар не были обнаружены патогенные варианты, имеющие отношение к фенотипу пациентов; вероятно патогенные варианты, имеющие отношение к фенотипу пациентов; случайные (вторичные) находки (согласно списку генов ACMG). В двух супружеских парах были выявлены варианты неясной клинической значимости, описанные ниже.

Супружеская пара № 1: Б., 27 лет (ж), С., 36 лет (м), Москва, национальность: русские. В течение 6 лет половой жизни без предохранения с момента вступления в брак беременность не наступала. Обследовались с 2017 по 2021 гг., причина бесплодия не была установлена. Проходили лечение с 2018 по 2020 гг.: две внутриматочные инсеминации, две программы ЭКО: в естественном цикле и в цикле, стимулированном по «длинному» протоколу с агонистами гонадотропин рилизинг-гормона; беременность не наступила. В 2020 г. было три попытки ЭКО с партнером и одна попытка с использованием донорской спермы – во всех программах эмбрионы останавливались в развитии на 3–4 сутки (табл. 1). Обратились в Центр, 03.03.2021 установлен диагноз: «Бесплодие неясного генеза. Повторные неудачи вспомогательных репродуктивных технологий. Арест раннего эмбриогенеза» и рекомендовано проведение программы ЭКО: получено 12 ооцитов, из них зрелых – 7, оплодотворилось 2 ооцита – 2 зиготы, образовалось 2 бластоцисты, наступила беременность, благополучно завершившаяся родами.

118-1.jpg (144 KB)

У женщины из данной супружеской пары выявлен вариант неясной клинической значимости: ранее не описанный гетерозиготный вариант нуклеотидной последовательности в гене рецептора ФСГ (FSHR) (2-48963163-A-G), приводящий к замене аминокислоты (p. Tyr553Cys, NM_000145.4). Программы-предсказатели dbNSFP, PolyPhen, Sift классифицируют вариант как патогенный. Варианты в гене FSHR типа миссенс описаны, в том числе, у пациентов с аутосомно-рецессивной дисгенезией яичников (OMIM: 233300, Ovarian dysgenesis 1) и аутосомно-доминантным синдромом гиперстимуляции яичников (OMIM: 608115, Ovarian hyperstimulation syndrome). Вариант не зарегистрирован в контрольной выборке gnomAD и RUSeq.

Супружеская пара № 2: К., 34 года (ж), К., 33 года (м), Москва, национальность: русские. В течение 10 лет половой жизни без предохранения в браке беременность не наступала. В 2015 г. был установлен диагноз: «Бесплодие неясного генеза», была проведена овариальная стимуляция с внутриматочной инсеминацией, беременность не наступила. С 2017 по 2021 гг. было три попытки ЭКО с получением достаточного количества ооцитов (12, 14, 21 ооцитов соответственно), но низким выходом бластоцист (1, 2, 2 бластоцисты соответственно), переносом одной бластоцисты в каждой программе, криопереносом оставшихся бластоцист, пригодных для переноса по данным преимплантационного генетического тестирования на анеуплоидии (ПГТ-А), беременность не наступила (табл. 2).

Супружеская пара № 3: П., 39 лет (ж), П., 40 лет (м), Калужская область, национальность: русские. В течение 5 лет половой жизни без предохранения в браке беременность не наступала. Обследовались с 2012 по 2019 гг., причина бесплодия не была установлена. Было проведено две внутриматочные инсеминации: со стимуляцией овуляции и в естественном цикле, беременность не наступила. В 2019 г. был установлен диагноз: «Бесплодие неясного генеза» и рекомендовано проведение программы ЭКО. С 2019 по 2021 гг. было четыре попытки ЭКО, в трех из которых отмечался низкий выход бластоцист, в результате последней попытки на сроке 5–6 недель была диагностирована левосторонняя трубная беременность – произведена лапароскопия с тубэктомией слева (табл. 3).

Супружеская пара № 4: Б., 38 лет (ж), Д., 40 лет (м), Республика Северная Осетия–Алания, национальность: осетины. В течение 5 лет половой жизни без предохранения в браке беременность наступила один раз в 2017 г., прервалась на сроке 4 недели, без осложнений. В 2020 г. было две попытки ЭКО, беременность не наступила. В 2021 г. проведена третья попытка ЭКО: при достаточном количестве ооцитов (получено 17 ооцитов, из них зрелых – 15) и зигот (10 зигот) бластоцист не образовалось (0 бластоцист) (табл. 4).

119-1.jpg (250 KB)

Супружеская пара № 5: Л., 34 года (ж), Л., 36 лет (м), Московская область, национальность: русские. В течение 13 лет половой жизни без предохранения в браке беременность не наступала. Обследовались с 2012 г., причина бесплодия не была установлена. Была проведена овариальная стимуляция с внутриматочной инсеминацией, беременность не наступила. С 2014 по 2021 гг. было четыре попытки ЭКО в разных клиниках с получением достаточного количества ооцитов (17, 24, 20, 20 ооцитов соответственно), удовлетворительным количеством бластоцист (7, 6, 14, 4 бластоцист соответственно), переносом двух бластоцист в трех программах (в четвертой программе перенос не производился в связи с низким качеством эмбрионов), однако беременность не наступила. ПГТ-А не проводилось, потому что пригодных для биопсии эмбрионов не было. В 2021 г. обратились в Центр, было рекомендовано проведение программы ЭКО: получено 22 ооцита, из них зрелых – 22, оплодотворился 1 ооцит – 1 зигота, образовалась 1 бластоциста, беременность не наступила (табл. 5). Ретроспективно установлен диагноз: «Бесплодие неясного генеза. Повторные неудачи ВРТ. Ооцитарный фактор?».

У мужчины выявлен вариант неясной клинической значимости: ранее описанный гетерозиготный вариант нуклеотидной последовательности в гене GNRHR (4-67740682-C-T), приводящий к замене аминокислоты в 262 позиции белка (p.Arg262Gln, NM_000406, rs104893837). Вариант описан в компаунд-гетерозиготной форме с другими вариантами и в гомозиготной форме у пациентов с гипогонадотропным гипогонадизмом (OMIM: 146110, Hypogonadotropic hypogonadism 7 without anosmia; OMIM: 138850#0002). Вариант зарегистрирован в контрольной выборке gnomAD в количестве 505 мутантных аллелей на 282244 хромосомы, в том числе 1 гомозигота, и RUSeq с количеством наблюдений 4/3376, частотой варианта 0.001185. По совокупности сведений, учитывая невыявление второго патогенного варианта в гене, его следует расценивать как вариант с неопределенной клинической значимостью.

Супружеская пара № 6: А., 35 лет (ж), А., 37 лет (м), Москва, национальность: русские. В течение 6 лет половой жизни без предохранения в браке беременность не наступала. Обследовались с 2019 г., причина бесплодия не была установлена. С 2020 по 2021 гг. было три попытки ЭКО, в которых получали мало ооцитов (3, 5, 5 ооцитов соответственно) и сопоставимое количество бластоцист (2, 2, 3 бластоцисты соответственно), проводились перенос 1 бластоцисты, криоперенос 1 бластоцисты, два раза - перенос 2 бластоцист высокого качества, соответственно, беременность не наступила. ПГТ-А не проводилось в связи с отсутствием пригодных для биопсии эмбрионов. В 2021 г. установлен диагноз: «Бесплодие неясного генеза», и рекомендовано проведение четвертой программы ЭКО: получено 5 ооцитов, из них зрелых – 5, оплодотворилось 3 ооцита – 3 зиготы, образовалось 2 бластоцисты высокого качества, обе перенесены, беременность не наступила (таблица 6).

Таким образом, при полноэкзомном секвенировании у пациентов с БНГ не было обнаружено известных вариантов, с которыми может быть связано бесплодие. Необходим дальнейший научный поиск молекулярных механизмов нарушения ранних этапов эмбриогенеза у пациентов с БНГ, включающий в первую очередь исследование качества гамет.

Обсуждение

БНГ диагностируется при отсутствии у пары явных дефектов репродуктивной системы. Ранее были уточнены признаки БНГ: нормальная частота оплодотворения, сниженная частота бластуляции за счет большей частоты остановок развития эмбрионов до 3-х суток культивирования и в то же время более высокое качество получаемых бластоцист. То есть зачатие у этих супружеских пар происходит с нормальной частотой, эмбрионы чаще останавливаются в развитии до 3-х суток, бластоцисты образуются реже, но часто они хорошего качества; поэтому беременность может наступать, но время до ее достижения увеличивается; при этом возраст и увеличивающаяся с возрастом коморбидность пациентов с БНГ приводят к дополнительному ограничению реализации их репродуктивной функции. ЭКО сокращает время до получения бластоцисты хорошего качества и, соответственно, наступления беременности, то есть является методом патогенетического лечения БНГ [5].

Выявленные нарушения раннего эмбриогенеза у пациентов с БНГ обусловили необходимость научного поиска возможных причин и факторов нарушения ранних этапов эмбриогенеза, прежде всего наиболее консервативных – генетических, у пациентов с БНГ.

Ооцит является основным фактором, определяющим эмбриональное развитие человека [25]. Качество ооцита – это способность ооцита успешно оплодотворяться и обеспечивать нормальное развитие эмбриона на ранних стадиях. Существующие в настоящее время сведения не дают основания для заключения, что БНГ вызвано низким качеством ооцитов при удовлетворительном количестве зрелых ооцитов – более 6 на пункцию (в данном исследовании – в среднем 10,8), удовлетворительной частоте оплодотворения (в данном исследовании – 76,5%), наличии возможности криоконсервации эмбрионов в 30% попыток ЭКО (в данном исследовании – 68,1%) и частоте ранних потерь беременности, сопоставимой с общепопуляционной (в данном исследовании – 9,2% в анамнезе) [5, 26]. В то же время невозможно исключить низкое качество ооцитов как причину БНГ [27].

По данным литературы, низкое качество ооцитов при бесплодии может быть обусловлено вариантами генов [11, 12]. Было проведено пилотное исследование – полноэкзомное секвенирование 6 супружеских пар (женщин и мужчин), целенаправленно отобранных из группы БНГ, для того чтобы исключить предполагаемые генетические причины бесплодия у супружеских пар с БНГ.

При полноэкзомном секвенировании наиболее типичных пациентов с БНГ не было обнаружено патогенных и вероятно патогенных вариантов, с которыми может быть связано бесплодие. У женщины из супружеской пары № 1 и мужчины из супружеской пары № 5 были выявлены варианты неясной клинической значимости: FSHR (2-48963163-A-G) и GNRHR (4-67740682-C-T) соответственно, связь которых с БНГ маловероятна. По данным литературы, вариант FSHR (2-48963163-A-G) описан у пациентов с дисгенезией яичников и синдромом гиперстимуляции яичников, однако эти заболевания относились к критериям невключения в группу БНГ. Вариант GNRHR (4-67740682-C-T) описан у пациентов с гипогонадотропным гипогонадизмом, что также было исключено, так как все мужчины из супружеских пар с БНГ имели нормозооспермию на момент включения в исследование и проходили обследование у уролога, по результатам которого данное заболевание не было установлено.

На данном этапе развития науки и фармакологии генетические находки могут повлиять только на решение пациентов об использовании донорских гамет в программах ЭКО; поэтому основная тактика ведения пациентов с БНГ не меняется и заключается в раннем проведении ЭКО с переносом эмбриона хорошего качества (>3, AA, AB, BA по классификации Гарднера) на 5–6-е сутки культивирования [5].

Заключение

Проведено пилотное исследование – полно­экзомное секвенирование 6 супружеских пар (женщин и мужчин), целенаправленно отобранных из группы БНГ на основании клинико-анамнестических данных, лабораторных, инструментальных показателей, результатов использования методов вспомогательной репродукции. У пациентов не было обнаружено известных вариантов, с которыми может быть связано бесплодие.

Необходим дальнейший научный поиск молекулярных механизмов нарушения ранних этапов эмбриогенеза, включающий в первую очередь исследование качества гамет, у пациентов с БНГ.

Список литературы

1. Practice Committee of the American Society for Reproductive Medicine.Electronic address: asrm@asrm.org. Evidence-based treatments for coupleswith unexplained infertility: a guideline. Fertil. Steril. 2020; 113(2): 305-22.https://dx.doi.org/10.1016/j.fertnstert.2019.10.014.

2. ACOG Committee. Infertility workup for the women’s health specialist: ACOGCommittee Opinion, Number 781. Obstet Gynecol. 2019; 133(6): e377-e384.https://dx.doi.org/10.1097/AOG.0000000000003271.

3. Киракосян Е.В., Назаренко Т.А., Бачурин А.В., Павлович С.В. Клиническаяхарактеристика и эмбриологические показатели программ экстракорпорального оплодотворения у женщин с бесплодием неясногогенеза. Акушерство и гинекология. 2022; 5: 83-90. https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.5.83-90. (Kirakosyan E.V., Nazarenko T.A., Bachurin A.V., Pavlovich S.V. Clinical characteristics and embryological parametersin IVF programs for women with unexplained infertility. Akusherstvoi Ginekologiya/Obstetrics and Gynecology. 2022; 5: 83-90. (in Russian)).https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.5.83-90.

4. Duffy J.M.N., Adamson G.D., Benson E., Bhattacharya S., Bofill M., Brian K.et al. Top 10 priorities for future infertility research: an internationalconsensus development study. Hum. Reprod. 2020; 35(12): 2715-24.https://dx.doi.org/10.1093/humrep/deaa242.

5. Бачурин А.В., Киракосян Е.В., Назаренко Т.А., Павлович С.В. Анализ эмбриологического этапа программ экстракорпорального оплодотворения упациентов с бесплодием неясного генеза. Акушерство и гинекология.2022; 9: 81-6. https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.9.81-86. (Bachurin A.V.,Kirakosyan E.V., Nazarenko T.A., Pavlovich S.V. Analysis of the embryonicstage of in vitro fertilization programs in patients with unexplained infertility.Akusherstvo i Ginekologiya/Obstetrics and Gynecology. 2022; 9: 81-6.(in Russian)). https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.9.81-86

6. Sfakianoudis K., Maziotis E., Karantzali E., Kokkini G., Grigoriadis S., Pantou A.et al. Molecular drivers of developmental arrest in the human preimplantationembryo: a systematic review and critical analysis leading to mapping futureresearch. Int. J. Mol. Sci. 2021; 22(15): 8353. https://dx.doi.org/10.3390/ijms22158353.

7. Jelin A.C., Vora N. Whole exome sequencing: applications in prenatalgenetics. Obstet. Gynecol. Clin. North Am. 2018; 45(1): 69-81. https://dx.doi.org/10.1016/j.ogc.2017.10.003.

8. Salfati E.L., Spencer E.G., Topol S.E., Muse E.D., Rueda M., Lucas J.R. et al.Re-analysis of whole-exome sequencing data uncovers novel diagnostic variantsand improves molecular diagnostic yields for sudden death and idiopathic diseases.Genome Med. 2019; 11(1): 83. https://dx.doi.org/10.1186/s13073-019-0702-2.

9. Суспицын Е.Н., Тюрин В.И., Имянитов Е.Н., Соколенко А.П.Полноэкзомное секвенирование: принципы и диагностические возможности. Педиатр. 2016; 7(4): 142-6. https://dx.doi.org/10.17816/PED74142-146. (Suspitsyn E.N., Tyurin V.I., Imyanitov E.N., Sokolenko A.P.Whole-exome sequencing: principles and diagnostic capabilities. Pediatrician.2016; 7(4): 142-6. (in Russian)). https://dx.doi.org/10.17816/PED74142-146.

10. Gorcenco S., Ilinca A., Almasoudi W., Kafantari E., Lindgren A.G., Puschmann A.New generation genetic testing entering the clinic. Parkinsonism Relat. Disord.2020; 73: 72-84. https://dx.doi.org/10.1016/j.parkreldis.2020.02.015.

11. Chen B., Zhang Z., Sun X., Kuang Y., Mao X., Wang X. et al. Biallelicmutations in PATL2 cause female infertility characterized by oocyte maturationarrest. Am. J. Hum. Genet. 2017; 101(4): 609-15. https://dx.doi.org/10.1016/j.ajhg.2017.08.018.

12. Sang Q., Li B., Kuang Y., Wang X., Zhang Z., Chen B. et al. Homozygous Mutationsin WEE2 Cause Fertilization Failure and Female Infertility. Am. J. Hum. Genet.2018; 102(4): 649-57. https://dx.doi.org/10.1016/j.ajhg.2018.02.015.

13. Miller D.T., Lee K., Chung W.K., Gordon A.S., Herman G.E., Klein T.E. etal. ACMG SF v3.0 list for reporting of secondary findings in clinical exomeand genome sequencing: a policy statement of the American College ofMedical Genetics and Genomics (ACMG). Genet. Med. 2021; 23(8): 1381-90.https://dx.doi.org/10.1038/s41436-021-01172-3.

14. Miller D.T., Lee K., Chung W.K., Gordon A.S., Herman G.E., Klein T.E. et al.Correction to: ACMG SF v3.0 list for reporting of secondary findings in clinicalexome and genome sequencing: a policy statement of the American College ofMedical Genetics and Genomics (ACMG). Genet. Med. 2021; 23(8): 1582-4.https://dx.doi.org/10.1038/s41436-021-01278-8.

15. Рыжкова О.П., Кардымон О.Л., Прохорчук Е.Б., Коновалов Ф.А.,Масленников А.Б., Степанов В.А., Афанасьев А.А., Заклязьминская Е.В.,Ребриков Д.В., Савостьянов К.В., Глотов А.С., Костарева А.А., Павлов А.Е.,Голубенко М.В., Поляков А.В., Куцев С.И. Руководство по интерпретации данных последовательности ДНК человека, полученных методами массового параллельного секвенирования (MPS) (редакция 2018,версия 2). Медицинская генетика. 2019; 18(2): 3-23. https://dx.doi.org/10.25557/2073-7998.2019.02.3-23. (Ryzhkova O.P., Kardymon O.L.,Prohorchuk E.B., Konovalov F.A., Maslennikov A.B., Stepanov V.A.,Afanasyev A.A., Zaklyazminskaya E.V., Rebrikov D.V., Savostianov K.V.,Glotov A.S., Kostareva A.A., Pavlov A.E., Golubenko M.V., Polyakov A.V.,Kutsev S.I. Guidelines for the interpretation of massive parallel sequencingvariants (update 2018, v2). Medical genetics. 2019; 18(2): 3-24 (in Russian)).https://dx.doi.org/10.25557/2073-7998.2019.02.3-23.

16. Rehm H.L., Bale S.J., Bayrak-Toydemir P., Berg J.S., Brown K.K., Deignan J.L. etal. ACMG clinical laboratory standards for next-generation sequencing. Genet.Med. 2013; 15(9): 733-47. https://dx.doi.org/10.1038/gim.2013.92.

17. Ensembl Variant Effect Predictor (VEP). Available at: https://www.ensembl.org/info/docs/tools/vep/index.html

18. gnomAD - Genome Aggregation Database. Available at: https://gnomad.broadinstitute.org/

19. OMIM. An Online Catalog of Human Genes and Genetic Disorders. Availableat: https://omim.org/

20. ClinVar. Available at: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/clinvar/

21. LOVD v.3.0 - Leiden Open Variation Database. Online gene-centered collectionand display of DNA variants. Available at: https://www.lovd.nl/

22. RUSeq - проект по объединению генетической информации между клиническими лабораториями и геномными центрами России. Доступнопо: https://ruseq.ru/#/ (RUSeq - a project to pool genetic informationbetween clinical laboratories and genomic centers in Russia. Available at:https://ruseq.ru/#/ (in Russian)).

23. Barbitoff Y.A., Khmelkova D.N., Pomerantseva E.A., Slepchenkov A.V.,Zubashenko N.A., Mironova I.V. et al. Expanding the Russian allele frequencyreference via cross-laboratory data integration: insights from 6,096 exomesamples. medRxiv. 2021. https://dx.doi.org/10.1101/2021.11.02.21265801.

24. Human Phenotype Ontology (HPO). Available at: https://hpo.jax.org/app/

25. Larbuisson A., Raick D., Demelenne S., Delvigne A. ICSI diagnostic: a way toprevent total fertilization failure after 4 unsuccessful IUI. Basic Clin. Androl.2017; 27: 18. https://dx.doi.org/10.1186/s12610-017-0061-z.

26. Bosselut H., Paulmyer-Lacroix O., Gnisci A., Bretelle F., Perrin J., Courbiere B.Facteurs pronostiques des chances de naissance vivante enfecondation in vitropour infertilite inexpliquee: etude de cohorte. (Prognostic factors of live-birth afterin vitro fertilization for unexplained infertility: A cohort study). Gynecol. Obstet.Fertil. Senol. 2021; 49(7-8): 601-7. (in French). https://dx.doi.org/10.1016/j.gofs.2021.01.002.

27. Киракосян Е.В., Екимов А.Н., Павлович С.В. Значение ооцитарногофактора в развитии бесплодия неясного генеза. Акушерство и гинекология. 2022; 1: 14-21. https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.1.14-21. (Kirakosyan E.V., Ekimov A.N., Pavlovich S.V. The significance of theoocyte factor in the development of infertility of unclear genesis. Akusherstvoi Ginekologiya/Obstetrics and Gynecology. 2022; 1: 14-21. (in Russian)). https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.1.14-21.

Поступила 17.10.2022

Принята в печать 28.11.2022

Об авторах / Для корреспонденции

Киракосян Евгения Валериковна, аспирант, кафедра акушерства, гинекологии, перинатологии и репродуктологии ИПО, Первый МГМУ им. И.М. Сеченова
Минздрава России (Сеченовский Университет), НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России, +7(916)574-79-63, evgeniya.kirakosyan@mail.ru,
https://orcid.org/0000-0002-6021-2449, 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4.
Померанцева Екатерина Алексеевна, к.б.н., отделение клинической генетики, Институт репродуктивной генетики, НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова
Минздрава России, e.pomerantseva@gmail.com, https://orcid.org/0000-0002-2027-2738, 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4.
Павлович Станислав Владиславович, к.м.н., Ученый секретарь, НМИЦ АГП им. академика В.И. Кулакова Минздрава России; профессор кафедры акушерства, гинекологии, перинатологии и репродуктологии ИПО, Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет), +7(495)438-20-88,
s_pavlovich@oparina4.ru, https://orcid.org/0000-0002-1313-7079, 117997, Россия, Москва, ул. Академика Опарина, д. 4.
Автор, ответственный за переписку: Евгения Валериковна Киракосян, evgeniya.kirakosyan@mail.ru

Вклад авторов: Киракосян Е.В., Померанцева Е.А., Павлович С.В. – разработка концепции и дизайна исследования, анализ данных литературы, редактирование; Киракосян Е.В., Померанцева Е.А. – сбор и обработка материала, статистическая обработка данных; Е.В. Киракосян – написание текста.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование: Финансирование данной работы проводилось лабораторией Института репродуктивной генетики ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России.
Одобрение Этического комитета: Протокол исследования одобрен Ученым советом ФГАОУ ВО «Первый МГМУ
им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет) (Выписка из приказа № 4070/ОП-32, 30.09.2020), локальным Этическим комитетом ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет) (Выписка из протокола № 33-20, 25.11.2020), Комиссией по этике биомедицинских исследований
ФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России (Выписка из протокола № 11, 12.11.2020).
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на участие в исследовании, в том числе использование их данных в публикациях.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Киракосян Е.В., Померанцева Е.А., Павлович С.В.
Полноэкзомное секвенирование супружеских пар
с бесплодием неясного генеза (пилотное исследование).
Акушерство и гинекология. 2022; 12: 115-121
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.247

Также по теме

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.