CD163 положительные альтернативно активированные моноциты как маркер раннего выкидыша

Фарзалиева А.В., Сотникова Н.Ю., Борзова Н.Ю.

ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России, Иваново, Россия
Цель: Разработать новый способ прогнозирования самопрозвольного выкидыша у женщин с угрозой прерывания в ранние сроки гестации на основании определения содержания альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, в периферической венозной крови.
Материалы и методы: Обследована 71 женщина в сроке 5–12 недель беременности; своевременными родами завершилась беременность у 54 женщин (1-я группа), самопроизвольным выкидышем (в ранние и поздние сроки беременности) – у 17 женщин (2-я группа). На проточном цитометре FACScanto II (Becton Dickinson, USA) определялось относительное содержание CD14+CD16++ моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163. Материалом для исследований служила периферическая венозная кровь.
Результаты: У женщин обследуемых групп содержание классически активированных и промежуточных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, не имело статистически значимой разницы. Однако содержание альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, у женщин, беременность которых закончилась самопроизвольным выкидышем, статистически отличалось от показателей женщин, беременность которых завершилась своевременными родами.
Заключение: Содержание альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163 в периферической крови может использоваться в качестве предиктора самопроизвольного выкидыша у женщин с угрожающим ранним выкидышем.

Ключевые слова

беременность
угрожающий ранний выкидыш
самопроизвольный выкидыш
моноциты
скавенджер рецептор CD163

Угрожающий самопроизвольный выкидыш является наиболее частым осложнением беременности. Согласно литературным данным, 10-20% клинически диагностированных беременностей заканчивается выкидышем; причем до 80% гестационных потерь приходится на первый триместр [1]. Этиология данной патологии носит многофакторный характер; по данным современных исследователей одним из наиболее значимых патогенетических факторов данной патологии считается нарушение иммунных механизмов, включая факторы врожденного иммунитета [2]. Клетки макрофагального ряда обладают высокой пластичностью и широким спектром действия, в связи с чем им отводится важная роль в патогенезе невынашивания беременности [3]. Моноциты подразделяются на 3 субпопуляции: классически, промежуточно и альтернативно активированные; все они выполняют различные функции [4]. Имеются данные об участии альтернативно активированных моноцитов в формировании иммунологической толерантности к семиаллогенному плоду [5].

Цель исследования. Разработать новый способ прогнозирования самопрозвольного выкидыша у женщин с угрозой прерывания в ранние сроки гестации на основании определения содержания альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, в периферической венозной крови.

Материалы и методы

Проведено ретроспективное исследование. Всего была исследована 71 женщина в сроке 5–12 недель гестации – пациентки гинекологического отделения стационара клиники, беременность которых осложнилась угрожающим самопроизвольным выкидышем (женщины обследовались согласно протоколу «Выкидыш в ранние сроки беременности: диагностика и тактика ведения» от 16.05.2016 г.). Было проведено наблюдение за женщинами в течение всей беременности и оценка исходов. Своевременными родами завершилась беременность у 54 женщин (1-я группа), самопроизвольным выкидышем (в ранние и поздние сроки беременности) – у 17 женщин (2-я группа). Материалом для исследования служила периферическая венозная кровь женщин, которая забиралась при поступлении в стационар, до начала сохраняющей терапии. Обогащенную популяцию мононуклеарных клеток периферической крови получали стандартным методом скоростного центрифугирования в двойном градиенте плотности фиколл-урографина (d=1,06 и d=1,078) при 1500 об/мин в течении 30 минут. Стандартным методом многоцветной проточной цитофлюорометрии на проточном цитометре FACScanto II (Becton Dickinson, USA) с использованием программного обеспечения FACSDiva определяли поверхностный фенотип моноцитов. В работе использовали анти CD14, анти CD16 и анти-CD163 (Invitrogen, USA), меченные перидининхлорофиллом (PerCP), конъюгированные либо с FITC, либо с PE. В гейте моноцитов по интенсивности экспрессии CD14 и CD16 определяли относительное содержание классически активированных (CD14++CD16-), промежуточных (CD14++CD16+) и альтернативно (CD14+CD16++) активированных моноцитов согласно стандартной методике [6] (рис. 1, 2). Доля клеток, экспрессирующих рецептор CD163, оценивалась в гейтах классически, промежуточно и альтернативно активированных моноцитов (рис. 3).

73-1.jpg (184 KB)

Статистический анализ

Для статистического анализа использовались следующие программы Statistica for Windows 13.0, Microsoft Excel 2010 и MedCalс. Качественные показатели указывались абсолютным значением и определялись показатели частоты абс. (%). С целью оценки значимости межгрупповых различий сравнение категориальных данных проводилось с использованием критерия χ2 с поправкой Йейтса. Значимым пороговым уровнем считали 0,05. Количественные показатели, отличались от нормального распределения и сравнивались методом Мана–Уитни, данные записывались в виде медианы, верхнего и нижнего квартилей (Ме (Q25%–Q75%)). Для определения порогового значения в предлагаемом диагностическом способе проводился ROC-анализ. Данные представлены в виде площади под кривой (AUC) с 95% доверительным интервалом (ДИ).

Результаты

Возраст женщин 2-й группы был выше, чем в 1-й группе, но не имел статистической разницы (32 (28;35) лет и 30 (28;34) лет, соответственно; р>0,05) (табл. 1). Пациентки 2-й группы чаще имели рабочие специальности и привычную интоксикацию в виде табакокурения, по сравнению с 1-й группой. В анамнезе женщин, беременность которых завершилась самопроизвольным выкидышем чаще, чем у женщин, беременность которых завершилась своевременными родами, регистрировались острые респираторно-вирусные инфекции (ОРВИ), хронический рецидивирующий назолабиальный герпес, бесплодие, самопроизвольные выкидыши ранних и поздних сроков.

74-2.jpg (254 KB)

Как видно из данных, приведенных в таблице 2, доля классически активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, не отличалась при сравнении женщин 1-й и 2-й групп (р>0,05). Экспрессия скавенджер рецептора CD163 промежуточными моноцитами была значительно ниже, чем на классически активированных клетках. При этом различия между показателями женщин исследуемых групп отсутствовали (р>0,05). При сравнении содержания альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, между группами выявлено, что у женщин, беременность которых завершилась самопроизвольным выкидышем, данный показатель был в 3 раза выше, чем у женщин, беременность которых завершилась своевременными родами (р=0,0007).

На основании полученных данных после проведения ROC-анализа, был разработан способ прогнозирования самопроизвольного выкидыша у женщин с угрожающим ранним выкидышем путем определения содержания альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, в периферической венозной крови беременной женщины в сроке 5–12 недель беременности до начала сохраняющей терапии. Пороговое значение для моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, рассчитанное на основании ROC-анализа, составило 15,6%. При значении данного показателя 15,6% или выше прогнозируют самопроизвольный выкидыш с высокой точностью – 87,50%, чувствительностью – 90,0% (95% ДИ 55,5–98,3) и специфичностью – 81,8% (95% ДИ 59,7–94,7) (рис. 4), что подтверждает преимущества заявляемого способа. Площадь под ROC-кривой равна 90%.

74-1.jpg (66 KB)

Обсуждение

Установлено, что ведущими факторами риска развития самопроизвольного выкидыша у женщин с угрожающим ранним выкидышем являются: старший репродуктивный возраст, рабочая специальность, привычная интоксикация в виде табакокурения, а также наличие в анамнезе ОРВИ, рецидивирующего назолабиального герпеса, бесплодия, репродуктивных потерь в виде самопроизвольных выкидышей ранних и поздних сроков, что согласуется с литературными данными [7, 8].

CD163 является гемоглобиновым рецептором – мусорщиком, который специфически экспрессируется на субпопуляциях активированных моноцитов и играет важную роль в иммунном гомеостазе, выполняет протективные, противовоспалительные и иммуномодулирующие функции [9]. CD163 служит диагностическим параметром активации моноцитов при воспалительных заболеваниях [10]. Все популяции моноцитов несут скавенджер рецептор CD163 [11]. В нашем исследовании мы не выявили существенной разницы в уровне содержания классически активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, между исследуемыми группами. Однако в литературе имеются данные о возможности использования данного показателя в качестве предиктора исхода аутоиммунных, онкологических, инфекционных и воспалительных заболеваний [12–14]. Работы, в которых эти клетки оцениваются при беременности единичны и посвящены они преэклампсии [15]. Авторы предполагают взаимосвязь между повышенным уровнем провоспалительных цитокинов и уровнем растворимой формы sCD163 в плазме крови женщин с тяжелыми формами преэклампсии, что, по их мнению, свидетельствует о нарушении модуляции системного воспалительного ответа у этих пациенток.

В литературе нет работ, описывающих изменения содержания альтернативно активированных моноцитов, экспрессирующих скавенджер рецептор CD163, при беременности. Мы предполагаем, что альтернативно активированные моноциты, экспрессирующие скавенджер рецептор CD163, в норме необходимы для поддержания иммунного равновесия и пролонгирования беременности за счет регуляции активности иммунокомпетентных клеток и процесса воспаления, которое наблюдается при угрожающем раннем выкидыше.

Заключение

Таким образом, у женщин с угрожающим ранним выкидышем, экспрессия скавенджер рецептора CD163 на моноцитах была максимальной в популяции классически активированных клеток и минимальной в популяции альтернативно активированных клеток. Экспрессия скавенджер рецептора CD163 в популяции альтернативно активированных моноцитов у пациенток с данной патологией зависела от исхода беременности. Полученные данные позволили разработать новый способ прогнозирования самопроизвольного выкидыша у пациенток с угрожающим ранним выкидышем. Раннее прогнозирование выкидыша позволит оптимизировать тактику ведения беременной женщины с угрожающим ранним выкидышем.

Список литературы

  1. Подзолкова Н.М., Скворцова М.Ю., Денисова Т.В. Самопроизвольное прерывание беременности: современные подходы к диагностике, лечению и профилактике. М.: ГЭОТАР-Медиа; 2018. 224с.
  2. Laviron M., Boissonnas A.A. Ontogeny of еumor-associated macrophages. Front. Immunol. 2019; 10: 1799. https//dx.doi.org/10.3389/fimmu.2019.01799. eCollection 2019.
  3. Доброхотова Ю.Э., Ганковская Л.В., Бахарева И.В., Свитич О.А., Малушенко С.В., Магомедова А.М. Роль иммунных механизмов в патогенезе невынашивания беременности. Акушерство и гинекология. 2016; 7: 5-10.
  4. Kowalska W. Expression of CD163 and HLA-DR molecules on the monocytes in chronic lymphocytic leukemia patients. Folia Histochem. Cytobiol. 2020; 58(1): 17-24. https//dx.doi.org/10.5603/FHC.a2020.0002.
  5. Mor G., Abrahams V.M. Potential role of macrophages as immunoregulators of pregnancy. Reprod. Biol. Endocrinol. 2003; 1: 119. https://dx.doi.org/10.1186/1477-7827-1-119.
  6. Ziegler-Heitbrok L., Hofer T.P.J. Toward a refined definition of monocyte subsets. Front. Immunol. 2013; 4: 23. https//dx.doi.org/10.3389/fimmu.2013.00023. eCollection 2013.
  7. Батрак Н.В., Малышкина А.И. Факторы риска привычного невынашивания беременности. Вестник Ивановской медицинской академии. 2016; 21(4): 37-41.
  8. Синякова А.А., Шипицына Е.В., Будиловская О.В., Болотских В.М., Савичева А.М. Клинико-анамнестические и микробиологические предикторы невынашивания беременности. Журнал акушерства и женских болезней. 2019; 68(2): 59-70.
  9. Shahzad F., Bashir N.N., Ali A., Jabeen S., Kashif M., Javaid K. et al. Decreased classical monocytes and CD163 expression in TB patients: an indicator of drug resistance. Braz. J. Microbiol. 2021; 52(2): 607-17. https://dx.doi.org/10.1007/s42770-021-00454-x.
  10. Yamashita M., Utsumi Y., Nagashima H., Nitanai H., Yamauchi K. S100A9/CD163 expression profles in classical monocytes as biomarkers to discriminate idiopathic pulmonary fibrosis from idiopathic nonspecifc interstitial pneumonia. Sci. Rep. 2021; 11(1): 12135. https://dx.doi.org/10.1038/s41598-021-91407-9.
  11. Kowalska W. Expression of CD163 and HLA-DR molecules on the monocytes in chronic lymphocytic leukemia patients. Folia Histochem. Cytobiol. 2020; 58(1): 17-24. https//dx.doi.org/10.5603/FHC.a2020.0002.
  12. Babania O., Mohammadi S., Yaghoubi E., Sohrabi A., Seyedhosseini F.S., Abdolahi N. et al. The expansion of CD14+ CD163+ subpopulation of monocytes and myeloid cells-associated cytokine imbalance; candidate diagnostic biomarkers for celiac disease (CD). J. Clin. Lab. Anal. 2021; 35(10): e23984. https//dx.doi.org/10.1002/jcla.23984.
  13. Krijgsman D., De Vries N.L., Andersen M.N., Skovbo A., Tollenaar R.A.E.M., Møller H.J. et al. CD163 as a biomarker in colorectal cancer: the expression on circulating monocytes and tumor-associated macrophages, and the soluble form in the blood. Int. J. Mol. Sci. 2020; 21(16): 5925. https//dx.doi.org/10.3390/ijms21165925.
  14. Aktas Cetin E., Pur Ozyigit L., Gelmez Y.M., Cakir E., Gedik A.H., Deniz G. CD163 levels, pro- and anti-inflammatory cytokine secretion of monocytes in children with pulmonary tuberculosis. Pediatr. Pulmonol. 2017; 52(5): 675-83. https//dx.doi.org/10.1002/ppul.23617.
  15. Nunes P.R., Romão-Veiga M., Peraçoli J.C., Araujo Costa R.A., de Oliveira L.G., Borges V.T.M. et al. Downregulation of CD163 in monocytes and its soluble form in the plasma is associated with a pro-inflammatory profile in pregnant women with preeclampsia. Immunol. Res. 2019; 67(2-3): 194-201. https//dx.doi.org/10.1007/s12026-019-09078-8.

Поступила 28.06.2022

Принята в печать 08.07.2022

Об авторах / Для корреспонденции

Фарзалиева Айтен Видадиевна, очный аспирант, Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Минздрава России, +7(920)370-46-67, farzaliyeva_a_v@mail.ru, https://orcid.org/0000-0001-5019-3566, 153045, Россия, Иваново, ул. Победы, д. 20.
Сотникова Наталья Юрьевна, д.м.н., профессор, заведующая лабораторией клинической иммунологии, Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Минздрава России, +7(906)619-36-53, niimid.immune@mail.ru, https://orcid.org/0000-0002-0608-0692,
153045, Россия, Иваново, ул. Победы, д. 20.
Борзова Надежда Юрьевна, д.м.н., профессор, главный н.с. кафедры акушерства и гинекологии, неонатологии, анестезиологии и реаниматологии, Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства им. В.Н. Городкова Минздрава России, +7(910)993-14-36, borzova__n@mail.ru, https://orcid.org/0000-0003-2069-7135, 153045, Россия, Иваново, ул. Победы, д. 20.
Автор, ответственный за переписку: Айтен Видадиевна Фарзалиева, farzaliyeva_a_v@mail.ru

Вклад авторов: Сотникова Н.Ю., Борзова Н.Ю. – концепция и дизайн исследования; Фарзалиева А.В. – сбор и обработка материала, статистическая обработка, написание текста; Фарзалиева А.В., Сотникова Н.Ю., Борзова Н.Ю. – редактирование, утверждение окончательного варианта статьи, ответственность за целостность всех частей статьи.
Конфликт интересов: Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.
Финансирование: Исследование не имело спонсорской поддержки.
Одобрение Этического комитета: Исследование было одобрено локальным Этическим комитетом ФГБУ «Ивановский научно-исследовательский институт материнства и детства имени В.Н. Городкова» Минздрава России.
Согласие пациентов на публикацию: Пациенты подписали информированное согласие на публикацию своих данных.
Обмен исследовательскими данными: Данные, подтверждающие выводы этого исследования, доступны по запросу у автора, ответственного за переписку, после одобрения ведущим исследователем.
Для цитирования: Фарзалиева А.В., Сотникова Н.Ю., Борзова Н.Ю.
CD163 положительные альтернативно активированные моноциты
как маркер раннего выкидыша.
Акушерство и гинекология. 2022; 8: 71-75
https://dx.doi.org/10.18565/aig.2022.8.71-75

Также по теме

Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, которые обеспечивают правильную работу сайта.