Введение
Выделяют истинно грибковые заболевания кожи, обусловленные грибами рода Malassezia, или малассезиозы, такие как разноцветный лишай и малассезиа-фолликулит, а также заболевания, ассоциированные с Malassezia — самостоятельные заболевания воспалительного генеза, диагностируемые у пациентов любого возраста.
Распространенность видов дрожжевых грибов
По данным многочисленных наблюдений, 97% клинически здоровых людей являются носителями дрожжевых грибов на коже головы и 92% – на коже туловища. Некультуральными методами наиболее многочисленными эукариотами, представляющими 50–80% общего кожного микробиома, были идентифицированы дрожжевые грибы Malassezia spp., представленные на всех участках тела, кроме стопы.
Исследования процесса колонизации грибами здоровой кожи человека показали, что распространенность колеблется от 5% на первой неделе жизни до 30% на 2–4 нед жизни. У новорожденных детей процесс колонизации кожи грибами рода Malassezia spp. начинается сразу при рождении и увеличивается до возраста 6–12 мес. Используя молекулярно-биологические методы, японские ученые выявили Malassezia spp. в 89% образцов с поверхности кожи новорожденных сразу после родов и в 100% случаев в первый день жизни. В исследовании участвовали доношенные новорожденные, приложенные к груди матери в первые сутки жизни. Наиболее вероятным механизмом обсеменения кожи, продемонстрированным японскими исследователями, является прямой контакт новорожденного с кожей матери. В дальнейшем колонизация кожи человека остается относительно низкой вплоть до периода полового созревания, когда наступает активация сальных желез, обеспечивающая лучшую среду обитания, и популяция дрожжей вновь поднимается до стабильно высокого уровня.
Патофизиология кожных заболеваний, вызванных или усугубляемых Malassezia spp., в значительной степени неизвестна из-за сложных взаимодействий этого комменсала с кожей. Отсутствие возможности синтеза de novo жирных кислот у грибов рода Malassezia (за исключением M. pachydermatis) обусловлено отсутствием генов, кодирующих синтазу жирных кислот в клетках, что определяет необходимость использования грибковыми клетками для поддержания процессов жизнедеятельности источников липидов, содержащихся в секрете сальных желез. В здоровой коже грибы Malassezia spp. используют необходимые питательные вещества для роста, не вызывая заболевания. Когда этот процесс нарушается, дрожжи адаптируются, модифицируя экспрессию ферментов, участвующих в получении энергии, и в роговом слое происходит гидролиз триглицеридов. Конечным продуктом этой реакции служат арахидоновая и олеиновая кислоты, которые, в свою очередь, разобщают связи между кератиноцитами, приводя к развитию патологического процесса.
В то же время опубликованы исследования, показывающие, что, несмотря на липофильные свойства грибов, отдельные виды обнаруживаются в урогенитальном и гастроинтестинальном трактах человека.
Современная диагностика системных грибковых инфекций основывается на использовании классических микробиологических методов (культуральное исследование крови, ликвора, глубокого трахеобронхиального аспирата и биологического материала из других локусов) с последующей идентификацией грибов до вида при использовании время-пролетной MALDI-TOF-масс-спектрометрии (MALDI-TOF-MS). Однако, грибы Malassezia spp. практически не культивируются на селективных для дрожжевых грибов плотных питательных средах, не размножаются в стандартных питательных средах для гемокультивирования и, соответственно, не могут быть выделены и идентифицированы традиционными культуральными методами, что создает определенные сложности при проведении диагностического поиска.
В связи с этим, очевидно, существует необходимость в усовершенствовании методов диагностики малассезиа-ассоциированных заболеваний. Все большую популярность в диагностике возбудителей малассезиа-ассоциированных заболеваний в настоящее время приобретают молекулярно-генетические методы (ПЦР в режиме реального времени, секвенирование 18(26)S pРНК), позволяющие провести точную и быструю идентификацию грибов до вида, при использовании минимального количества биологического материала в кратчайшие сроки.
В ФГБУ НМИЦ АГП им. акад. В.И. Кулакова было проведено пилотное исследование, цель которого – уточнить частоту распределения видов Malassezia на коже здоровых людей и с малассезиа-ассоциированными дерматозами.
В исследовании приняли участие 120 клинически здоровых взрослых, у которых были взяты соскобы с кожи в/ч головы, лица и груди. Соскобы были взяты урогенитальным зондом типа А в транспортную среду Стор-Ф. Также были обследованы 22 пациента с малассезиа-ассоциированными дерматозами, из них 7 с разноцветным лишаем, 15 с себорейным дерматитом. Для выявления и типирования возбудителей грибковых инфекций рода Candida, Malassezia, Saccharomyces и Debaromyces в эпителиальном соскобе кожи использовали метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) в режиме реального времени с применением ПЦР тест-системы «Микозо-Скрин» (ДНК-Технология, Россия) и дополнительный набор праймеров для идентификации видов M. restricta, M. globosa, M. sympodialis, M. achydermatis.
Грибы рода Malassezia были выявлены в 113 образцах (94,17%) соскобов с кожи в/ч головы, 119 образцах (99,17%) соскобов с кожи груди, 113 образцах (95%) соскобов с кожи лица здоровых людей.
При видовой идентификации было установлено, что во всех локусах преобладающими видами были M. restricta (90%) и M. globosa (72,5%). Результаты представлены в таблице.
Достоверных различий между локусами грудь и лицо выявлено не было, поэтому локусы были объединены в один – гладкая кожа.
В видовом разнообразии между образцами соскобов с кожи здоровых людей и пациентов с малассезиа-ассоциированными дерматозами достоверных различий выявлено не было.
При количественной оценке Malassezia spp. были определены следующие референтные интервалы:
- соскобы с в/ч головы 103,8 (103,4–104,5) копий ДНК-мишени в образце;
- соскобы с гладкой кожи 103,8 (102,8–104,6) копий ДНК-мишени в образце;
- соскоб с патологических очагов 104,7 (104,4–105,2) копий ДНК-мишени в образце.
В соскобах с патологических очагов наблюдалась более высокая обсемененность дрожжевыми грибами по сравнению со здоровой кожей.
Вывод
Наиболее часто встречаемые виды грибов рода Malassezia spp. По данным настоящего исследования, оказались такие виды, как M. restricta и M. globosa, что согласуется с данным международных научных исследований для европейских стран. Дрожжевые грибы являются представителями нормального микробиома кожи человека, однако при нарушении иммунологической толерантности кожи могут реализовывать свой патогенный потенциал, вызывая различные дерматозы.
